Webinar poświęcony podstawowym założeniom pomiaru apoptozy, cyklu komórkowego i proliferacji za pomocą cytometrii przepływowej.
Nagranie na YouTube →
Najważniejsze kontrole do analizy apoptozy
- Kontrola negatywna — komórki nietraktowane, niebarwione.
- Kontrola negatywna traktowana — komórki traktowane badanym związkiem lub stresorem, ale niebarwione. Sprawdza, czy preparatyka próbek zmienia poziom autofluorescencji.
- Kontrola barwiona pojedynczo aneksyną V — komórki indukowane do apoptozy, bez barwnika przyżyciowego.
- Kontrola barwiona pojedynczo barwnikiem przyżyciowym — komórki martwe (lub martwe wymieszane z żywymi) wybarwione jedynie barwnikiem LIVE/DEAD, bez aneksyny V.
Dodatkowo warto rozważyć kontrole indukowanej i nieindukowanej apoptozy oraz barwienie podwójne.
Cykl komórkowy
Cykl komórkowy to dość podstawowa aplikacja cytometryczna, ale wymagająca, jeśli chodzi o preparatykę próbki. Dobranie odpowiedniego barwnika i jego stężenia, gęstości komórek, trawienia RNA, czasu inkubacji czy utrwalania zajmuje więcej czasu, niż można się spodziewać po przeczytaniu protokołu znalezionego online. Krytycznie ważnym etapem analizy danych jest dyskryminacja dubletów, najlepiej dwuparametrowa (np. FSC H/W oraz Nuclear Stain H/W). Wykluczenie z dalszej analizy komórek poliploidalnych i agregatów podnosi jakość i rozdzielczość wyniku.