FlowPol

Baza wiedzy i blog

Ideą tej sekcji jest publikowanie na bieżąco artykułów naukowych i popularnonaukowych, not technicznych i wybranych protokołów. Wkrótce otworzymy pełny dostęp do bazy wiedzy — na razie zebraliśmy tu materiały z webinarów.

01

Nagranie — webinar 3: cytometria obrazowa

Prezenter: dr Michał Konieczny

Zapraszamy do obejrzenia nagrania trzeciego z serii webinarów Fundacji FlowPol. Tym razem przygotowaliśmy materiał o bardzo ciekawej odmianie cytometrii — wciąż niszowej, ale mocno zyskującej na popularności — cytometrii obrazowej (IFC).

Nagranie na YouTube

02

Nagranie i podsumowanie — webinar 2: podstawowe aplikacje komórkowe

Apoptoza, cykl komórkowy, proliferacja

Webinar poświęcony podstawowym założeniom pomiaru apoptozy, cyklu komórkowego i proliferacji za pomocą cytometrii przepływowej.

Nagranie na YouTube

Najważniejsze kontrole do analizy apoptozy

  1. Kontrola negatywna — komórki nietraktowane, niebarwione.
  2. Kontrola negatywna traktowana — komórki traktowane badanym związkiem lub stresorem, ale niebarwione. Sprawdza, czy preparatyka próbek zmienia poziom autofluorescencji.
  3. Kontrola barwiona pojedynczo aneksyną V — komórki indukowane do apoptozy, bez barwnika przyżyciowego.
  4. Kontrola barwiona pojedynczo barwnikiem przyżyciowym — komórki martwe (lub martwe wymieszane z żywymi) wybarwione jedynie barwnikiem LIVE/DEAD, bez aneksyny V.

Dodatkowo warto rozważyć kontrole indukowanej i nieindukowanej apoptozy oraz barwienie podwójne.

Cykl komórkowy

Cykl komórkowy to dość podstawowa aplikacja cytometryczna, ale wymagająca, jeśli chodzi o preparatykę próbki. Dobranie odpowiedniego barwnika i jego stężenia, gęstości komórek, trawienia RNA, czasu inkubacji czy utrwalania zajmuje więcej czasu, niż można się spodziewać po przeczytaniu protokołu znalezionego online. Krytycznie ważnym etapem analizy danych jest dyskryminacja dubletów, najlepiej dwuparametrowa (np. FSC H/W oraz Nuclear Stain H/W). Wykluczenie z dalszej analizy komórek poliploidalnych i agregatów podnosi jakość i rozdzielczość wyniku.

03

Nagranie — webinar 1: wprowadzenie do cytometrii przepływowej

Pierwszy webinar FlowPol

Zapraszamy do odsłuchania naszego pierwszego webinaru — „Wprowadzenie do cytometrii przepływowej”.

Nagranie na YouTube